磁珠法核酸提取 —— 核酸提取崛起之路
隨著分子生物學(xué)技術(shù)的高速發(fā)展,以核酸雜交、核酸擴(kuò)增及核酸序列分析為代表的分子診斷和檢測(cè)技術(shù)在諸多領(lǐng)域中日益凸顯出至關(guān)重要的作用。樣本處理為分子診斷實(shí)驗(yàn)的“第一步”,也是最關(guān)鍵的一步,其獲得的核酸質(zhì)量的優(yōu)劣將直接影響到下游分子生物學(xué)試驗(yàn)的成敗。
隨著分子生物學(xué)技術(shù)的高速發(fā)展,以核酸雜交、核酸擴(kuò)增及核酸序列分析為代表的分子診斷和檢測(cè)技術(shù)在諸多領(lǐng)域中日益凸顯出至關(guān)重要的作用。樣本處理為分子診斷實(shí)驗(yàn)的“第一步”,也是最關(guān)鍵的一步,其獲得的核酸質(zhì)量的優(yōu)劣將直接影響到下游分子生物學(xué)試驗(yàn)的成敗。全球爆發(fā)的新冠病毒,促使了核酸檢測(cè)市場(chǎng)的暴增,整個(gè)疫情期間國(guó)內(nèi)的核酸檢測(cè)市場(chǎng)將超過(guò)400億。
核酸的發(fā)現(xiàn)
1944年有報(bào)道描述:“當(dāng)溶液中的酒精體積達(dá)到9/10時(shí),有纖維狀物質(zhì)析出。如稍加攪動(dòng),這種物質(zhì)會(huì)向棉線繞在線軸上一樣繞在硬棒上,溶液中其他成分則以顆粒狀沉淀在下面。這一物質(zhì)具有很強(qiáng)的生物學(xué)活性?!边@個(gè)物質(zhì)就是DNA!直到1953年DNA雙螺旋模型之前,人們對(duì)于基因的理解仍然是抽象的。
核酸提取傳統(tǒng)方法
傳統(tǒng)的提取方法主要有:酚抽提法、親和層析柱、密度梯度離心和硅膠柱法。這些傳統(tǒng)提取方法可從不同組織樣本中分離出DNA和RNA,但這些技術(shù)中包含沉淀和離心等操作步驟,其所需的生物樣本量較大,提取步驟較為繁雜、費(fèi)時(shí)費(fèi)力,得率也不高,難以實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化操作,另外,大部分的傳統(tǒng)方法中還需要用到有毒化學(xué)試劑,對(duì)操作人員的健康具有潛在危害,因此,伴隨著分子生物學(xué)以及材料學(xué)的發(fā)展,采用磁珠的方法從液相系統(tǒng)中分離純化核酸的新方法已經(jīng)崛起。
磁珠法分離核酸的原理
磁珠是利用高分子材料或者生物分子包被四氧化三鐵核心而形成的可以被磁鐵吸附的同時(shí)納米或微米小球。用于核酸純化的磁珠表面功能基團(tuán)一般為羥基(OH)和羧基(COOH)其結(jié)構(gòu)如下電鏡圖。
磁珠分離核酸核心技術(shù)是固相可逆固定化技術(shù),但磁珠和核酸具體是如果相互作用吸附在一起,目前還不是很清楚,鹽橋理論是其中猜想之一。在利用磁珠結(jié)合核酸的體系中,由于緩沖液的作用核酸分子(DNA & RNA)會(huì)由線性變成球狀,暴露出核酸骨架上大量的負(fù)電基團(tuán)與反應(yīng)體系中的陽(yáng)離子連接,在磁珠外層負(fù)電基團(tuán)的作用下,形成“陰離子-陽(yáng)離子-陰離子”的鹽橋結(jié)構(gòu),使核酸分子被特異性地吸附到磁珠表面。而當(dāng)反應(yīng)緩沖液被棄除后,加入水性分子,會(huì)快速充分水化核酸分子,解除三者之間的離子相互作用,使吸附到磁珠上的核酸分子被純化出來(lái)。
磁珠法核酸提取的優(yōu)勢(shì)
海貍生物磁珠法核酸提取是納米科技與生物技術(shù)的完美結(jié)合,目前開(kāi)發(fā)成功的產(chǎn)品有二氧化硅羥基磁珠500nm,二氧化硅羥基磁珠1μm,二氧化硅羧基磁珠300nm等,具有其它DNA提取方法不可比擬的優(yōu)勢(shì):
(1)樣本需求量低:核酸提取體系可簡(jiǎn)單放大和縮小,微量的材料即可提到高濃度的核酸;
(2)操作簡(jiǎn)單快速:整個(gè)操作流程基本分為五步(裂解、結(jié)合、洗滌、干燥、洗脫),手動(dòng)操作可以30-40min完成,無(wú)需離心。
(3)全自動(dòng)化操作:采用核酸提取儀可實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化、高通量操作,一鍵啟動(dòng),即可實(shí)現(xiàn)幾十甚至幾百個(gè)樣品的提取,全過(guò)程最短9min可實(shí)現(xiàn);
(4)安全無(wú)毒無(wú)害:試劑不含酚等有毒化學(xué)試劑,完全符合現(xiàn)代化環(huán)保理念。